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反相高效液相色谱法测定盐酸左旋氧氟沙星的血药浓度

时间:2017-06-01  来源:本网  作者:admin  浏览次数:431

  反相高效液相色谱法测定盐酸左旋氧氟沙星的血药浓度付春梅李章万洪诤刘三康(华西医科大学药学院成都610041)入em=480nm),血浆样品经沉淀蛋白后直接进样。结果:血药浓度线性范围0063. 2%日内、日间相对标准偏差分别为22%4.6%和1.2%3.7%.结论:用乙醇作反相高效液相色谱流动相溶剂较甲醇有利于环境保护,建立的方法简便、灵敏、准确。

  沙星的光学活性S(―)异构体其抗菌活性约为氧氟沙星的2倍,具有抗菌活性强、不良反应小等特点。目前左旋氧氟沙星的药物动力学测定方法有微生物法,HPLC紫外检测法。本文采用乙醇作为流动相溶剂测定左旋氧氟沙星血药浓度,样品只需简单的沉淀蛋白后直接进样,用荧光检测,简便、灵敏,国内外6A高效液相色谱仪;RF―535荧光检测器;CTO―6A柱温箱;SCL―6A系统控制器;C一R4A数据处理机。盐酸左旋氧氟沙星对照品(含量大于99%)由北京天赐福生物医药有限公司提供,内标氟哌酸由东北制药六厂提供,制剂由某制药厂提供;流动相用水为超纯水;实验中所用乙醇及其它试剂均为分析纯。12名健康男性志愿受试者,平均年龄(20.9士0.79)岁,平均体重(60. 2±3.90)kg平均身高(169.7士3.34)cm.受试前所有的受试者接受健康检查均正常。

  2分析色谱条件卩m)流动相:乙醇一0.2molL(柱压降8.7MPa)柱温:35若用甲醇作流动相溶剂,流动相为甲醇一醋酸铵(pH 2.4)(30:70)(柱压降8.6MPa)其它条件与乙醇系统相同,样品保留时间与乙醇系统接近,见。

  3对照品贮备液、对照品血浆与内标溶液取盐酸左旋氧氟沙星对照品约15mg精密称定,置50mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液,冰箱4°C保存。临用时,用水稀释至所需浓度,即为盐酸左旋氧氟沙星对照品溶液。

  精密吸取适当浓度盐酸左旋氧氟沙星对照品溶液1mL,置50mL量瓶中,加健康人空白血浆稀释至刻度即得对照品血浆。用微量移液器分装至离心管(每支0.5mL)于冰箱一20C保存。

  取氟哌酸约2mg,精密称定,置500mL量并瓦中,用流动相配制的1.5mol°L1高氯酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为内标溶液,冰箱4C保存。

  4血浆样品前处理取血浆样品0.5mL置1.5mL离心管中,加入等体积氟哌酸内标溶液,摇匀,旋涡混合1min高速离心(12清液25ML进样。色谱图见。

  药物分析杂志5结果与讨论51线性关系取系列浓度盐酸左旋氧氟沙星对照品血浆0.5mL,同“血浆样品前处理”操作,以盐酸左旋氧氟沙星与内标色谱峰面积之比对盐酸左旋氧氟沙星血浆浓度(TmL1)进行直线回归,得标准曲线方程(n=6):52回收率和精密度取盐酸左旋氧氟沙星对照品血浆(高、中、低3种浓度),按“血浆样品前处理”项下操作,测定,计算方法回收率(n= 3)和日内、日间精密度(n=9),结果见表1.由对照品血浆经前处理后测得的峰面积与相同浓度左旋氧氟沙星对照品溶液测得的峰面积之比,计算净化回收率(n=3),结果见表1.表1血浆样品回收率和精密度药物浓度/净化回收率方法回收率精密度RSD/士日内日间53样品及对照品贮备液稳定性盐酸左旋氧氟沙星对照品贮备液置冰箱4°C保存,分别于第0,7,14,21,30d及血浆样品置冰箱一20°C保存,分别于第0,24,8d按前述方法测定,浓度的RSD均小于2%说明对照品贮备液在冰箱4C保存1个月、血浆样品冰箱一20C保存8d基本稳定。

  54样品前处理及检测方法的选择曾采用1. 5mol°L1高氯酸水溶液沉淀血浆蛋白后直接进样,但回收率较低,约为67%.经试验,用流动相配制1.5mol.L1高氯酸溶液,使回收率达80%以上,能够满足分析要求。紫外检测法‘3由于灵敏度较低,样品多需经过液一液萃取浓集后分析,操作繁琐,本文采用荧光检测法可以提高分析灵敏度,最低检测浓度0.0012°mL1(S/N>3);并且所建立的色谱条件克服了国外流动相酸性太强(pH 1.85),对色谱柱易造成损伤的缺点。

  55内标的选择预试了双氟哌酸、司帕沙星和氟哌酸,在所建立的色谱条件下,双氟哌酸、司帕沙星的保留时间均较长(大于10min),氟哌酸保留添与左旋簧承亲罱咏p完全分离因此选用氟哌酸为内标。

  56乙醇系统与甲醇系统的比较甲醇有视网膜毒性,其废液多由下水道排放或燃烧处理,对环境污染较大。本文采用乙醇作为反相高效液相色谱流动相溶剂,由于乙醇比例较低,35C柱温柱压降也不高(在保留时间与乙醇系统接近的条件下,用甲醇作流动相溶剂,所用有机溶剂比例较乙醇系统高,35C柱温柱压降与乙醇系统接近),不仅有利于环境保护和实验人员健康,还能减少有机溶剂用量。

  7血药浓度的测定及健康人体药代动力学12名健康男性志愿受试者随机分为两组,每组6人,按药代动力学研究要求,分别单次口服某厂生产的盐酸左旋氧氟沙星胶囊剂或进口片剂200mg.于给药后0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5,2,3,5,8,12,24h采血,分离血浆,一20C保存待测。受试者接受交叉给药各1次,2次试药间隔1周。2种制剂平均血药浓度经时曲线见,血药浓度结果用3P87程序拟合权重后均符合二室模型,口服国产胶囊剂和进口片剂后的各药代动力学参数十分相近,Tv%分别为(0.99剂200mg后,以进口片剂为100%的相对生物利用度为(104.6士17.8)%,对主要药动学参数Tmax、Cmax、AUC进行统计学t检验表明上述各项参数胶囊剂组和片剂组间的差异无统计意义(P

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